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公司新聞


黃芪甲苷的新型提取方法研究

黃芪是豆科植物蒙古黃芪Astragalus memerana— ceus(Fisch.)Bunge var.mongholicus(Bunge)H siao或膜莢黃芪A.membranaeeus(Fisch.)Bunge的幹燥根。 昧甘。性微溫,具補氣升陽,益衛固表、托瘡生肌等功效,藥用曆史悠久、廣泛。其化學成 分有多糖、皂苷、黃酮等。現代藥理研究證明,黃芪多糖和黃芪皂苷為其中的主要成分,其 中皂苷以黃芪甲苷為主,有著廣泛的藥理作用。黃芪的有效成 分提取主要有醇提法和水提 法,黃芪類製劑多以水煮醇沉,取上清液部分或取醇沉部分,對藥用資源的浪費比較嚴重。 黃芪多糖提取的方法多為水煮醇沉,得率和含量較低,精製過程繁瑣且耗費大量有機溶劑。 黃芪皂苷類化合物粗提取有水煮醇沉 取上清液和醇提法,精製方法多先以醇類溶劑(如 乙 醇或甲醇等)提取,然後以正丁醇萃取。其法操作繁瑣,且有機溶劑用量大。現將“液一液連 續萃取方法及裝置”發明專利技術應用到黃芪化學成分黃芪甲苷提取中,提出一種新型提取 方法,為解決上述問題提供參考。

1 材料

日本島津LC22010A高效液相色譜儀,自動進 樣係統,CLASS2VPver.6.0色譜數據工作 站;SPSS 12.0軟件包;黃芪藥材由甘肅效靈生物開發有限責 任公司提供,並經蘭州大學 藥學院生藥研究所馬誌 剛教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalus mere— branaceus(Fisch)Bge.Var.mongholicus(Bge) Hsiao.;黃芪甲苷(中國藥品生物製品檢定 所,批號 0815-200406)。

2 黃芪甲苷含量測定

2.1 色譜條件 ODS-1色譜柱(4.6 mm×250 mm,5t~m)乙腈一水(2:1)洗脫,進樣量10 L, 流速 1.0 mL·min~,檢測波長200 nm,柱溫25℃ 。
2.2 對照溶液製備精密稱取幹燥至恒重的黃芪甲苷對照品25 mg,置25 mI 量瓶中,加無 水乙醇 溶解至刻度,製成對照品溶液。
2.3 標準曲線的製作分別精密吸取對照品溶液 0.10,0.20,0.30,0.40 mL,分別加 入無水乙醇補 足至0.60 mL,各加入8 9,6香草醛無水乙醇試劑 0.50 mL,搖勻。緩緩 加入72 9/6硫酸5 mL,搖勻, 62。C水浴保溫20 min。取出後迅速冷卻至室溫,於 538 nm波長處測定。得回歸方程:A=一0.019 5 +0.020 2C,r=0.998 6(n=4),線性範圍16.67"-- 66.67 m g·L~ 。
2.4 樣品的測定精密稱取黃芪提取物樣品160 mg,加少量水溶解,定量轉移至分液漏鬥 中,用水 飽和的正丁醇萃取3次,每次10 mL。合並萃取 液,用正丁醇飽和的水10 mL 洗1次,減壓濃縮至 幹。以50 9,6甲醇一水20 mL溶解濃縮物,溶液以 0.5 mL·min 的 速度通過中性氧化鋁柱(4 g,100 ~ 200目),並繼續用50 甲醇一水溶液40 mL衝 柱。合 並通過液及洗液,減壓濃縮至於,以無水乙 醇溶解並定容至25 mL量瓶中,精密吸取樣品 濾液 0.25 mL,加無水乙醇補足至0.6 mL,按標準曲線 製備項下操作,測定樣品。
2.5 精密度試驗精密吸取上述對照品溶液,按標準曲線項下方法操作,連續重複測定5次, RSD 為1.28 9/6。
2.6 重複性試驗取黃芪提取物粉末,共5份,每份約160 mg,精密稱定,按樣品溶液的 製備項下 處理並測定,該批樣品黃芪甲苷含量為6.30 ,RSD為2.90。
2.7 加樣回收率試驗取上述已知含量的黃芪提 取物粉末,共6份,每份80 mg,精密稱 定,每份各 精密加入對照品溶液(含黃芪甲苷0.500 4 rag),按 供試品溶液的製備項下處 理並測定,得平均回收率 為103.87 9/6,RSD為1.81。
2.8 穩定性試驗 取黃芪提取物粉末1份約160 mg,精密稱定,按樣品溶液的製備項下處 理,分別 在0,8,16,24 h,1,2,3 d分別進樣,記錄峰麵積,結 果RSD為2.88。

3 提取新方法研究

黃芪加95 乙醇在液一液連續萃取裝置中提 取,提取液濃縮、真空幹燥即得[5]。

3.1 藥材對溶劑的吸附量將黃芪藥材粉碎過20 目篩,取30 g,置於250 mL的盛有適量 95 乙醇的 燒杯中混勻,每0.5 h過濾得藥渣稱重。結果80 rain後質量不再增加,吸附量 達42.1 g,約是藥材量 的1.4倍。因此3倍量的溶劑就可以保證藥材與溶 劑充分接觸, 使提取的化學成分容易在藥材和溶劑 之間達到平衡。
3.2 黃芪甲苷在藥材和溶劑中濃度達到平衡時的 時間確定取100 mL燒瓶3個,分別準確 稱取10 g左右的黃芪,加入95 乙醇25 mL,在3()℃攪拌 回餾,30 rain後每10 min用移液 管取1 mL溶液, 並補加95 9/5乙醇1 mL。取出的溶液放冷至室溫, 過濾,蒸除乙醇, 根據“2.4”項操作作為樣品溶液測 定黃芪甲苷的含量,取3個平行試驗的平均值。分 別在 40,5O,60,70℃下同法操作。結果如圖1。由 圖可知,50℃ 效率較高,平衡時間大約在 4()~61) min之間,平衡時溶劑中質量濃度大約在0.1 g·L 左右。
3.3 提取新方法的醇提工藝正交實驗設計 在醇 提工藝中主要影響因素就是溶劑循環次數 和溫度,前者可以取決於濃縮子係統的蒸餾速度(溶劑循環 周期數)和時間。根據“3.2”結 果可以比較合理安排 正交試驗的因素和水平,見表1。
取100 mL燒瓶9個,分別準確稱取10 g左右 的黃芪,加人25 mL 95 9/6乙醇,放入磁 子,安裝到 液一液連續萃取裝置上l_5]。分別根據正交試驗設計 進行提取,提取完畢,蒸 除溶劑。60℃ 真空幹燥至 恒重。根據“2.4”項下樣品溶液操作,測定黃芪甲苷 含量(每1 g原藥材所含的總黃酮量)。結果見表2。
3.4 方差分析結果表2直觀分析,黃芪甲苷含量 的極差數據R,,>Rn>R.、,各因素作 用主次為B>D >A,A!B 較佳。綜合方差分析結果可看出(表 3),因素B、D的P<().()5.對 黃芪甲苷含量的影響 有統計學意義;而 素A的P>().()5,對含量的影 響無統計學意義。 rh此為減少能源消耗,降低生產 成本。最佳提取條件的搭配應為A. I)2,即溶劑循 環3 個周期。提取溫度4()℃ ,蒸餾時間3 h。
醇提最佳T藝的驗證:按A, D 最佳條件提 取,測定黃芪甲苷含量為2.523 5 mg·g ( =5, RSD = 7.4 )

4 討論

“液一液連續萃取方法及裝置”發明專利是一種新穎的提取方法,是對現有提取理論和方法 新穎組合、優化。與傳統方法比較,提取理論並未改變,不同點在於對現有理論、技術應用 的重組改造。所以生產工藝控製關鍵技術參數與傳統工藝有較大差異:(1)確定藥材對溶劑 的吸附量:提取子係統通過溶劑循環周期控製濃度梯度,無需加大溶劑體積,隻要維持溶劑 與藥材的充分接觸就可以。所以確定藥材的溶劑吸附量,一方麵用來估算生產能力,另一方 麵確定工藝研究中估算溶劑循環周期數範圍。 (2)提取物在藥材和溶劑中濃度達到平衡的時 間:對於某種藥材,使用特定溶劑,在一定的攪拌速度、提取溫度下,被提取物在藥材和溶 劑中濃度梯度變化 速度也一定。所以必須考查提取物在藥材和溶劑中濃度達到平衡最短時 間。基於這些數據來試驗工藝控製關鍵技術參數中的提取時間。(3)確定提取溫度;對於某 種藥材,使用特定的溶劑,在一定的攪拌速度下,被提取物在藥材和溶劑中濃度梯度變化速 度受溫度影響,從而直接影響提取效率與速度。因此,通過考查提取溫度、藥材的溶劑吸附 量和提取物 在藥材和溶劑中濃度達到平衡的時間,選擇優化工藝的影響因素水平。
根據文獻報道,傳統方法提取黃芪甲苷,含量在0.047~1.862 mg·g (以原藥材計算),利 用本文方法提取黃芪甲苷,含量為2.523 5 mg·g~ ,收率上升。本結果表明,新工藝生 產周期短、操作簡 便、環境汙染較小、產品質量、品質明顯高,具有一定的應用前景。